SNB-19人膠質(zhì)瘤干冰細胞

【細胞縮寫】 SNB-19細胞

【細胞名稱】 SNB-19(人膠質(zhì)瘤細胞)

【背景資料】 見細胞說明書

【細胞消化時注意把握消化時間，消化不夠會導(dǎo)致吹打細胞時造成損傷，一般消化時間是2-3分鐘，但以鏡檢時大部分細胞縮回球形為準，一般2次即可將細胞吹打下來，消化不夠進行細胞吹打易損傷細胞。細胞系的凍存液配方:90%FBS+10%DMSO，貼壁細胞若出現(xiàn)分布不均，成島狀生長，可將細胞進行消化，重懸打散細胞，加入新鮮培養(yǎng)基進行培養(yǎng)】 細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國內(nèi)外有名大學(xué)建系

【代次】 P4

【規(guī)格】 復(fù)蘇T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存1ml凍存管(兩支)

【細胞數(shù)】 1*10(6)

【生物安全級別】 1

【生物體】 人

【組織來源】 膠質(zhì)

【細胞形態(tài)】 上皮狀

【細胞特性】 貼壁

【特別注意:如使用公共實驗室或者初次接觸細胞培養(yǎng)，建議添加雙抗培養(yǎng)，貼壁細胞收到當(dāng)天切忌立刻消化，請將細胞換液后放置培養(yǎng)箱孵育到第二天再做消化傳代，請優(yōu)先選擇直徑6cm的培養(yǎng)皿進行傳代培養(yǎng)，如果細胞為貼壁細胞，而收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài)，請將懸浮的細胞即時離心，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天;同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基培養(yǎng)3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細胞都沒有出現(xiàn)增值而是繼續(xù)脫落死亡，請及時聯(lián)系實驗室技術(shù)人員會跟進解決】

【細胞檢測】 細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌

【培養(yǎng)條件】 詳見細胞說明書

【傳代方法】 建議1:2-1:3 兩天換液一次

【凍存條件】 詳見細胞說明書

【主要文獻】 請具體查閱相關(guān)發(fā)表文章

幾種實驗室細胞培養(yǎng)基成分的作用:

1.NaHCO3的作用是什么?與CO2一起形成緩沖系統(tǒng)，保持培養(yǎng)基PH值穩(wěn)定。

2.丙酮酸鈉的作用是什么?丙酮酸鈉可以作為細胞培養(yǎng)中的替代碳源，盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是如果沒有葡萄糖的話，細胞也可以代謝丙酮酸鈉。

丙酮酸鈉的貯存液濃度一般為50mM，-20℃保存，培養(yǎng)基中的終濃度為1mM.

3.加入HEPES有何好處?培養(yǎng)基中常用的Buffer system是碳酸氫鹽，它可提供營養(yǎng)，但卻在生理PH值條件下會降低緩沖能力。而HEPES是一種很強的Buffer，加入HEPES能使細胞培養(yǎng)基在PH7.2-7.6條件下緩沖能力增強。Hepes的貯存液濃度一般為1M，常溫保存。培養(yǎng)基中的終濃度為25mM，即5ml 1M的Hepes加入到200ml*培養(yǎng)基中。

4.酚紅的作用是什么?酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為PH值指示劑:中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色。

5.谷氨酰胺的作用是什么?幾乎所有的細胞對谷氨酰胺都有膠高的要求。谷氨酰胺脫掉氨基后，可作為培養(yǎng)細胞的能量來源，參與蛋白質(zhì)的合成和能量代謝。在缺少谷氨酰胺時，細胞生長不良而死亡。所以，各種培養(yǎng)液中都含有較大量的谷氨酰胺。

谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，應(yīng)置-20℃冰凍保存，用前加入培養(yǎng)基中。加有谷氨酰胺的液體培養(yǎng)基4度冰箱儲存兩周以上時，應(yīng)重新加入原來量的谷氨酰胺。

實驗操作中常配制高濃度(100倍)的谷氨酰胺溶液(1ml/支)，分裝使用，-20℃保存。使用時，每支1ml的谷氨酰胺加入到99ml*培養(yǎng)基中，使其終濃度為2mM培養(yǎng)基。

SNB-19人膠質(zhì)瘤干冰細胞

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