HCC-78人肺腺癌細胞

【中文縮寫】    HCC-78細胞

 【背景資料】    見細胞說明書

 【產(chǎn)品來源】    細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國內外著名大學建系

     提供貼壁、半貼壁、懸浮、半懸浮、貼壁與懸浮混合等細胞特性，一般細胞培養(yǎng)PBS量是10%，如果出現(xiàn)細胞狀態(tài)不良情況，可以提高PBS量到15%，待細胞穩(wěn)定后，調回PBS量10%，對于初次實驗者，一般細胞培養(yǎng)，都需要加入雙抗防止細胞污染，細胞匯合度達到90%，我們開始寄送，細胞這樣可以保持細胞收到時，良好的細胞活力。復蘇細胞注意事項：

1收到細胞后當天換液，全部更換成客戶自己的新鮮培養(yǎng)基，放進培養(yǎng)箱，第二天再消化。

2邊觀察邊消化，根據(jù)細胞的形態(tài)，終止消化時間，采取以半分鐘間隔吹打細胞邊緣，如可吹打下來，即終止消化?？蛻裘鞅容^好的消化時間。

3隨細胞有一份細胞操作說明書，請客戶仔細查看。

4記得加1%雙抗，降低被污染的概率。另外盡早凍存留種，以備后用。

5售后時間為一周，僅限于細胞本身的質量問題，而因乙方自己不當操作（不規(guī)范操作，消化過度，不加雙抗導致的污染等）導致的細胞問題不在售后范疇。

6收到細胞后，如細胞狀態(tài)不佳，或培養(yǎng)中遇到問題，煩請當天盡快聯(lián)系，以便處理。當天及時反饋細胞情況和細胞照片是售后跟蹤處理重要的參考依據(jù)，請您務必重視。

7剛收到細胞時，胎牛血清可以用15%培養(yǎng)兩三天，利于細胞盡快恢復狀態(tài)，細胞狀態(tài)穩(wěn)定后，再調回10%即可。

（其中1,2條針對于貼壁細胞，懸浮細胞詳情請見細胞操作說明書）"   

    復蘇T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存1ml凍存管（兩支）

        【產(chǎn)品規(guī)格】    1*10（6）

        【安全級別】    1

        【產(chǎn)品種屬】    人

        【組織來源】    肺

        【細胞形態(tài)】    上皮細胞樣

        【細胞特性】    貼壁

"細胞培養(yǎng)基的選擇和使用：

MEM：成分簡單，細胞貼壁細胞

DMEM：分高糖型和低糖型。

IDMEM：適合細胞密度低，生長困難的細胞。如雜交細胞的篩選，DNA轉染后轉化細胞的篩選培養(yǎng)。

RPM1640：應用*泛的培養(yǎng)基之一。懸浮細胞培養(yǎng)，主要針對淋巴細胞，也適合其他細胞。

199、109培養(yǎng)基：成分齊全，培養(yǎng)效果較好。

F10培養(yǎng)基：適合小鼠及人類二倍體細胞培養(yǎng)。

F12培養(yǎng)基：適合單細胞分離培養(yǎng)及無血清培養(yǎng)。

McCoy’s5A培養(yǎng)基：特別適合原代細胞及較難培養(yǎng)細胞的生長。"    95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

           細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌

        【培養(yǎng)條件】    詳見細胞說明書

        【傳代方法】    建議1:2-1:3 兩天換液一次

        【凍存條件】    詳見細胞說明書

        【主要文獻】    請具體查閱相關發(fā)表文章

細胞傳代培養(yǎng)的胰酶消化法：

傳代培養(yǎng)：是指細胞從一個培養(yǎng)瓶以1：2或1：2以上的比例轉移，接種到另一培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)。傳代細胞，可根據(jù)不同細胞采取不同的方法進行細胞傳代。貼壁生長的細胞用消化法傳代，部分貼壁的細胞用直接吹打或用硅膠軟刮的刮除法傳代。懸浮細胞可采用加入等量新鮮培養(yǎng)基后直接吹打分散進行傳代，或用自然沉降法加入新培養(yǎng)基后再吹打分散進行傳代。

HCC-78人肺腺癌細胞

培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備基礎培養(yǎng)基( GIBCO，，添加NaHCO3 1.5g/L，丙酮酸鈉 0.11g/L)；優(yōu)質胎牛血清，10%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

細胞注意事項：

1.收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2.先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置數(shù)小時（4h左右），穩(wěn)定細胞狀態(tài)，切忌在溫箱內靜置過夜。

3.靜置后鏡檢，拍照，記錄細胞狀態(tài)。建議傳代后也拍照記錄細胞生長情況。

4.  懸浮細胞：將細胞瓶內液體都轉移至無菌離心管內，1000 轉/分鐘離心5min，培養(yǎng)基上清可備用，管底細胞沉淀用培養(yǎng)基重懸。鏡檢時若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞瓶內培養(yǎng)；若密度未超過80%，細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，待達到80%時再正常傳代。備注：聚團生長慢，有密度依賴，必須使用T25培養(yǎng)瓶豎立培養(yǎng)，3天一次半量換液一次，1-2周傳代一次。

貼壁細胞：若細胞密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，收集細胞瓶內的培養(yǎng)基，留8ml繼續(xù)培養(yǎng)至80%左右再傳代，瓶蓋可稍微擰松。備注：細胞貼壁慢，傳代后細胞放2天不動。

5.細胞瓶內的培養(yǎng)基含血清和雙抗，可收集后4℃保存?zhèn)溆?，可補加2%血清。剛開始傳代時建議一半用細胞瓶內的培養(yǎng)基，一半用客戶自備的培養(yǎng)基，使細胞逐漸適應培養(yǎng)條件，以免因不適應而造成生長狀態(tài)不佳。