A-375細(xì)胞，人惡性黑色素瘤細(xì)胞

產(chǎn)品名稱：A-375

細(xì)胞形態(tài)：上皮樣

組織來(lái)源：

傳代情況：P4-5代T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

細(xì)胞數(shù)量：1~3*10⁶細(xì)胞/25cm2培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)條件：RPMI1640+10%FBS

生長(zhǎng)條件： 95%空氣+5%二氧化碳 37攝氏度

生長(zhǎng)狀態(tài)：貼壁生長(zhǎng)

存儲(chǔ)條件：90%FBS+10%dmso

A-375細(xì)胞，人惡性黑色素瘤細(xì)胞

對(duì)于貼壁細(xì)胞，若細(xì)胞漂浮：培養(yǎng)瓶不開封，用75%酒精擦拭后平躺置于培養(yǎng)箱內(nèi)。次日觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉，換成新鮮的培養(yǎng)基；如細(xì)胞還不貼壁，將細(xì)胞離心收集移到新的培養(yǎng)瓶中，原培養(yǎng)瓶加部分新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo)，直到問題解決。對(duì)于懸浮細(xì)胞：收到細(xì)胞后，將細(xì)胞全部離心，去掉舊的培養(yǎng)基，換成新鮮的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

特別注意：（如使用公共實(shí)驗(yàn)室或者初次接觸，建議添加雙抗培養(yǎng)）

（1）貼壁細(xì)胞收到當(dāng)天有少量或沒有飄忽的細(xì)胞可以當(dāng)天換液，因?yàn)槁吠绢嶔ぴ斐纱罅匡h忽的情況時(shí)，請(qǐng)將細(xì)胞換液后放置培養(yǎng)箱孵育到第二天再做消化傳代，請(qǐng)優(yōu)先選擇直徑6cm的培養(yǎng)皿進(jìn)行傳代培養(yǎng)

（2）收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快更換為含10%血清的新鮮培養(yǎng)基，如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶，請(qǐng)?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加10%的血清，（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時(shí)間最長(zhǎng)不宜超過72小時(shí)）

（3）如簽收時(shí)出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂，漏液等情況請(qǐng)及時(shí)做好照片記錄并聯(lián)系SUER技術(shù)人員

細(xì)胞接收后的操作流程與注意事項(xiàng)：

1）貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢；適當(dāng)提高血清濃度（最高不能超過20%），或可根據(jù)該細(xì)胞生長(zhǎng)特性生長(zhǎng)密度，考慮胰酶消化后，轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)

2）如果細(xì)胞為貼壁細(xì)胞，而收到時(shí)呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài)，請(qǐng)將懸浮的細(xì)胞即時(shí)離心，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天；同時(shí)原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基培養(yǎng)3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細(xì)胞都沒有出現(xiàn)增值而是繼續(xù)脫落死亡，請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員會(huì)跟進(jìn)解決

3）生長(zhǎng)不均：貼壁細(xì)胞若出現(xiàn)分布不均，成島狀生長(zhǎng)，可將細(xì)胞進(jìn)行消化，重懸打散細(xì)胞，加入新鮮培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)

細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作）

（1）吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加2-3ml 0.25%胰酶進(jìn)行消化細(xì)胞（注意把握消化時(shí)間，通?？刂圃?-2min）

（2）注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存

（3）取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)?培養(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

（4）鏡下觀察消化情況，在HS505.T人淋巴結(jié)成纖維樣細(xì)胞生長(zhǎng)特性邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)（不建議消化到細(xì)胞漂浮）去掉胰酶，加6-8ml*培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散。