ProFlex  2x96 PCR使用教程

    ProFlex2x96PCR儀是ThermoFisher推出的雙模塊PCR系統(tǒng)，它配有兩個(gè)獨(dú)立的96孔加熱模塊。這意味著你可以把它當(dāng)成兩臺(tái)的PCR儀來使用——一個(gè)模塊跑常規(guī)擴(kuò)增，另一個(gè)模塊同時(shí)做梯度優(yōu)化，互不干擾。對(duì)于樣本量大、實(shí)驗(yàn)類型多的實(shí)驗(yàn)室來說，這種設(shè)計(jì)能節(jié)省不少排隊(duì)等待的時(shí)間。

    那么，ProFlex2x96PCR使用教程的核心是什么？簡(jiǎn)單來說，就是學(xué)會(huì)為兩個(gè)模塊分別設(shè)置程序、分別裝載樣品、分別啟動(dòng)運(yùn)行，同時(shí)掌握每個(gè)模塊自帶的梯度功能。掌握了這套操作邏輯，就能充分發(fā)揮雙模塊并行的效率優(yōu)勢(shì)。

先看整體流程：四步完成一次雙模塊PCR實(shí)驗(yàn)

    在深入展開每個(gè)操作細(xì)節(jié)之前，先用一個(gè)框架概括ProFlex2x96PCR使用教程的整體思路：

    第一步，開機(jī)與準(zhǔn)備——接通電源，檢查兩個(gè)模塊的狀態(tài)，清潔模塊孔，準(zhǔn)備PCR管或96孔板。第二步，分別為兩個(gè)模塊創(chuàng)建程序——通過觸摸屏為模塊A和模塊B各自設(shè)置溫度步驟、循環(huán)參數(shù)，需要時(shí)開啟梯度功能。第三步，裝載樣品并啟動(dòng)運(yùn)行——將反應(yīng)液加入對(duì)應(yīng)模塊的PCR管或96孔板中，關(guān)閉熱蓋，確認(rèn)參數(shù)后分別啟動(dòng)兩個(gè)模塊。第四步，運(yùn)行結(jié)束與收尾——分別取出樣品，查看運(yùn)行記錄，清潔儀器。

    這四步環(huán)環(huán)相扣，關(guān)鍵是每個(gè)模塊的操作相互獨(dú)立。以下逐一拆解每個(gè)環(huán)節(jié)的具體操作。

一、開機(jī)與準(zhǔn)備工作

    ProFlex2x96PCR使用教程的第一步，是做好開機(jī)前的檢查和準(zhǔn)備。

    接通電源并開機(jī)。確認(rèn)電源線連接穩(wěn)固，按下前面板的電源開關(guān)。系統(tǒng)啟動(dòng)后，觸摸屏?xí)M(jìn)入主界面。主界面上清晰顯示模塊A和模塊B的狀態(tài)圖標(biāo)，每個(gè)模塊都有獨(dú)立的溫度顯示和運(yùn)行狀態(tài)。

    檢查模塊與熱蓋。打開兩個(gè)模塊的熱蓋，分別目視檢查96孔模塊內(nèi)是否有異物或上次實(shí)驗(yàn)殘留的樣品。如有需要，用柔軟的無塵布蘸取少量70%乙醇輕輕擦拭模塊孔內(nèi)壁，晾干后再關(guān)閉熱蓋。兩個(gè)模塊需分別清潔，不可混用清潔工具。

    準(zhǔn)備耗材。ProFlex2x96的每個(gè)模塊均兼容0.1mL和0.2mLPCR單管、8聯(lián)管以及標(biāo)準(zhǔn)96孔板。根據(jù)實(shí)驗(yàn)通量選擇合適的耗材類型。確保所用管材規(guī)格正確，蓋緊管蓋或封好封板膜，防止運(yùn)行中液體蒸發(fā)。

二、創(chuàng)建與設(shè)置PCR程序

    程序設(shè)置是ProFlex2x96PCR使用教程的核心內(nèi)容。兩個(gè)模塊的程序設(shè)置獨(dú)立，你需要分別點(diǎn)擊進(jìn)入各模塊的編輯界面。

    新建程序。在主界面點(diǎn)擊模塊A的圖標(biāo)，進(jìn)入該模塊的操作界面，選擇“新建程序"。輸入程序名稱后，開始編輯溫度步驟。屏幕上會(huì)顯示一個(gè)步驟表格，每一行代表一個(gè)溫度階段。

    設(shè)置溫度與時(shí)間。典型的PCR程序包括預(yù)變性（如95°C、5分鐘），然后是循環(huán)步驟（95°C變性、55°C退火、72°C延伸，各30秒），最后是延伸（72°C、5分鐘）和4°C保持。點(diǎn)擊每一行的溫度和時(shí)間數(shù)值，通過彈出的數(shù)字鍵盤輸入目標(biāo)值。

    設(shè)置循環(huán)。在編輯界面中，點(diǎn)擊“添加循環(huán)"，輸入循環(huán)次數(shù)（通常為25-35個(gè)循環(huán)），然后將需要重復(fù)的步驟拖入循環(huán)體內(nèi)。ProFlex2x96支持嵌套循環(huán)，對(duì)于降落PCR等復(fù)雜程序也能靈活設(shè)置。

    為模塊B設(shè)置程序。返回主界面，點(diǎn)擊模塊B的圖標(biāo)，重復(fù)上述步驟，為模塊B設(shè)置相同或不同的程序。例如，模塊A設(shè)置一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的55°C退火程序用于常規(guī)擴(kuò)增，模塊B設(shè)置一個(gè)梯度程序用于新引物的退火溫度優(yōu)化。兩個(gè)模塊同時(shí)工作，這就是ProFlex2x96PCR使用教程中強(qiáng)調(diào)的并行優(yōu)勢(shì)。

    使用梯度功能優(yōu)化退火溫度

    每個(gè)96孔模塊都支持獨(dú)立的3區(qū)梯度功能，可在同一塊板上同時(shí)測(cè)試三種不同的退火溫度。

    設(shè)置梯度。在某個(gè)模塊的程序編輯界面中，找到退火步驟，點(diǎn)擊“梯度"選項(xiàng)。輸入目標(biāo)溫度范圍——例如將中間區(qū)域設(shè)為55°C，相鄰兩個(gè)區(qū)域可分別設(shè)為53°C和57°C，溫度差異在1-5°C之間可調(diào)。96孔板被劃分為三個(gè)縱向區(qū)域，每一區(qū)域的退火溫度獨(dú)立控制。

    這項(xiàng)功能在新引物優(yōu)化時(shí)非常實(shí)用，一次運(yùn)行就能鎖定理想的退火溫度。

    調(diào)用已存儲(chǔ)程序。如果之前已將常用程序保存在儀器中，可在主界面點(diǎn)擊“打開"或“程序庫"，從列表中選擇目標(biāo)程序直接調(diào)用。兩個(gè)模塊可分別調(diào)用不同的已存程序。

三、裝載樣品與啟動(dòng)運(yùn)行

    程序設(shè)置完畢后，ProFlex2x96PCR使用教程進(jìn)入實(shí)際操作階段。

    加樣。將配制好的PCR反應(yīng)液分裝至PCR管或96孔板中。使用多道移液器可提高96孔板的加樣效率。加樣時(shí)避免產(chǎn)生氣泡，如有氣泡可短暫離心排除。確認(rèn)管蓋已蓋緊或封板膜已壓實(shí)。兩個(gè)模塊的樣品可分別準(zhǔn)備，互不影響。

    放入模塊。打開對(duì)應(yīng)模塊的熱蓋，將PCR管或96孔板放入模塊中。確保管或板嵌入模塊孔內(nèi)，與加熱面充分接觸。96孔板方向應(yīng)與模塊標(biāo)識(shí)一致。分別裝載模塊A和模塊B的樣品。

    關(guān)閉熱蓋并啟動(dòng)。分別壓下兩個(gè)模塊的熱蓋，確認(rèn)鎖扣到位——熱蓋未關(guān)閉時(shí)，對(duì)應(yīng)的模塊不會(huì)啟動(dòng)加熱程序?；氐接|摸屏界面，確認(rèn)各模塊程序參數(shù)無誤后，可分別點(diǎn)擊各模塊的“Start"按鈕啟動(dòng)運(yùn)行。兩個(gè)模塊的啟動(dòng)時(shí)間可以不同，獨(dú)立。

    運(yùn)行中的監(jiān)控。運(yùn)行過程中，觸摸屏可隨時(shí)切換查看兩個(gè)模塊的實(shí)時(shí)溫度、剩余時(shí)間和循環(huán)進(jìn)度。ProFlex2x96支持通過ThermoFisherConnect平臺(tái)遠(yuǎn)程監(jiān)控，用戶可在電腦或平板上查看兩個(gè)模塊的運(yùn)行狀態(tài)。運(yùn)行期間不要打開熱蓋，以免影響溫度控制和擴(kuò)增效率。

四、運(yùn)行結(jié)束與收尾

    擴(kuò)增程序結(jié)束后，各模塊會(huì)自動(dòng)降至4°C或室溫保持。ProFlex2x96PCR使用教程中，收尾步驟同樣值得重視。

    取出樣品。分別打開兩個(gè)模塊的熱蓋，小心取出PCR管或96孔板。注意熱蓋和模塊表面可能仍有余溫，避免燙傷。兩個(gè)模塊可分別取樣，互不影響。

    查看運(yùn)行記錄。如需追蹤本次實(shí)驗(yàn)的溫度變化曲線，可在觸摸屏進(jìn)入對(duì)應(yīng)模塊的運(yùn)行記錄界面查看詳細(xì)數(shù)據(jù)。這些信息有助于在實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)異常時(shí)排查溫度控制方面的問題。

    清潔與關(guān)機(jī)。取出樣品后，分別檢查兩個(gè)模塊孔內(nèi)是否有冷凝水或?yàn)R液。如有，用無塵軟布蘸取70%乙醇輕輕擦拭，晾干后關(guān)閉熱蓋。如果當(dāng)天不再使用，可關(guān)閉電源開關(guān)。

五、日常維護(hù)與保養(yǎng)

    規(guī)范的日常維護(hù)是延長(zhǎng)儀器使用壽命、保持ProFlex2x96PCR使用教程中各模塊性能穩(wěn)定的基礎(chǔ)。

    每次使用后：用無塵軟布蘸取少量70%乙醇，分別擦拭兩個(gè)模塊的孔內(nèi)壁和熱蓋內(nèi)側(cè)，去除殘留物和冷凝水。不要使用強(qiáng)溶劑或研磨性清潔劑。定期檢查：每月檢查兩個(gè)模塊的熱蓋密封圈狀態(tài)，如有老化、變形或裂紋應(yīng)及時(shí)更換。溫度校準(zhǔn)：建議每年對(duì)兩個(gè)模塊分別進(jìn)行一次溫度驗(yàn)證，如發(fā)現(xiàn)某模塊實(shí)驗(yàn)結(jié)果持續(xù)異常，可聯(lián)系售后進(jìn)行專業(yè)校準(zhǔn)。長(zhǎng)期不用時(shí)：關(guān)閉電源，拔掉插頭，用防塵罩覆蓋。再次啟用前，先運(yùn)行一次空載程序，確認(rèn)兩個(gè)模塊升降溫均正常。

總結(jié)

    ProFlex2x96PCR使用教程，歸納起來就是“兩個(gè)模塊分別設(shè)程序、分別裝樣品、分別啟動(dòng)、分別清潔"的獨(dú)立操作邏輯。雙96孔模塊的設(shè)計(jì)讓這臺(tái)儀器既能聯(lián)手處理192個(gè)樣本的大通量實(shí)驗(yàn)，也能分開運(yùn)行兩種不同的PCR程序，相當(dāng)于兩臺(tái)PCR儀。掌握了每個(gè)模塊的獨(dú)立操作方法和梯度功能，就能在日常實(shí)驗(yàn)中靈活調(diào)度，讓高通量和多任務(wù)并行成為常態(tài)。規(guī)范操作、定期維護(hù)，是保持設(shè)備穩(wěn)定運(yùn)行、延長(zhǎng)使用壽命的有效途徑。

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