通用細(xì)胞凍存液操作步驟以及注意事項(xiàng)

       隨著實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)的發(fā)展，除了原代培養(yǎng)之外，人工開(kāi)發(fā)出來(lái)的細(xì)胞系的保存越來(lái)越重要。冷凍保存細(xì)胞系的優(yōu)點(diǎn)如下：1、減少基因漂移；2、減緩細(xì)胞系的衰老；3、穩(wěn)定表型；4、減少微生物污染及交叉污染機(jī)會(huì)等。細(xì)胞冷凍的原理在于盡可能降低細(xì)胞內(nèi)的晶體形成，減少細(xì)胞內(nèi)水凝固所形成的高濃度溶質(zhì)對(duì)細(xì)胞造成的低溫?fù)p傷，從提高細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)的存活率。細(xì)胞凍存的數(shù)量應(yīng)保證復(fù)蘇時(shí)低溫保護(hù)劑獲稀釋?zhuān)♂尯蟮募?xì)胞濃度扔高于正常傳代的細(xì)胞濃度為宜，這是因?yàn)楫?dāng)?shù)蜏乇Ｗo(hù)劑稀釋以后，該濃度一般不會(huì)對(duì)細(xì)胞造成毒性損傷。

     Leagene 通用細(xì)胞凍存液主要由FBS、DMSO等組成，是非常經(jīng)典的一種無(wú)菌凍存液。用于各種哺乳動(dòng)物原代細(xì)胞、傳代細(xì)胞系、雜交瘤細(xì)胞等的凍存。

自備材料：

1、 細(xì)胞計(jì)數(shù)器 2、 細(xì)胞凍存管 3、 超低溫冰箱或液氮 4、 超凈工作臺(tái)

操作步驟:

1、培養(yǎng)細(xì)胞至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)晚起，顯微鏡觀察其外觀、形態(tài)、有無(wú)污染等，取狀態(tài)良好的細(xì)胞進(jìn)行凍存操作。如為貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞，用胰蛋白酶消化并用*培養(yǎng)基終止消化，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)；如為懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

2、離心，棄上清

3、加入適量的通用細(xì)胞凍存液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到、ml，置于凍存管中，密封，不要擰的太緊，避免彎曲變形。

4、一般進(jìn)行凍存。亦可采用-20℃30min，-70℃過(guò)夜，后置于液氮罐中長(zhǎng)期存儲(chǔ)。

注意事項(xiàng)：

1、注意在超凈工作臺(tái)內(nèi)無(wú)菌操作，盡量避免污染。

2、初次使用融化后可在4℃保存1個(gè)月，單應(yīng)減少反復(fù)凍融的次數(shù)，以免失效。

3、雜交瘤細(xì)胞凍存時(shí)應(yīng)定期復(fù)蘇，檢查細(xì)胞的活性和分泌抗體的穩(wěn)定性。

4、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作